• Задать вопрос менеджеру

Twitter новости

Обучение письменному иноязычному общению на основе ИКТ http://t.co/IK2NAjncrk

Online-опрос

Антиплагиат онлайнДипломант
Яндекс.Метрика

Получение рекомбинантного сосудистого эндотелиального фактора роста

Предмет:Биология
Тип:Курсовая
Объем, листов:35
Word
Получить полную версию работы
Релевантные слова:роста, growth, фактора, рецептор, endothelial, factor, киназа, фактор, vascular, белок, protein, семейство, эндотелиального, мембранный, химии
Процент оригинальности:
81 %
Цена:1500 руб.
Содержание:

Список сокращений 3

Введение 5

Литературный обзор 6

Факторы роста 6

Общие сведения 6

Классификация факторов роста 7

VEGF 10

Общие сведения 10

Классификация и разновидности VEGF 10

VEGF 165. 11

VEGF 165b. 12

Участие VEGF в ангиогенезе 14

VEGF рецепторы 15

Материалы 18

Методы 21

Результаты и обсуждение 25

Выводы 30

Список литературы 31

Вступление:

Современные достижения биотехнологии в области работы с рекомбинантными ДНК открывают большие возможности для получения разнообразных белковых молекул, с нужной биологической активностью. Одной из важнейших проблем нового века является рост числа онкологических заболеваний. В связи с этим, важной задачей представляется разработка новых эффективных целевых препаратов. За последние 30 лет антиангиогенная терапия стала важной методикой в борьбе со злокачественными новообразованиями. Клинические данные продемонстрировали, что гуманизированные моноклональные антитела - препарат бевацизумаб - прицельно действующий на ключевой фактор ангиогенеза, а именно - сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), могут увеличить продолжительность жизни больных метастатическим колоректальным раком при назначении в качестве терапии первой линии в комбинации с химиопрепаратами [1]. В данной работе мы обсудим функции и значение VEGF, чтобы показать, что VEGF является обоснованной точкой приложения действия противоопухолевой терапии.

Цель данной курсовой работы состояла в разработке методики получения рекомбинантного сосудисто-эндотелиального фактора роста (VEGF). Для решения поставленной цели были определенны следующие задачи:

1. Осуществить химико-ферментативный синтез гена белка VEGF165, и клонировать в экспрессирующий вектор pET23d(+).

2. Получить высокоэффективный штамм-продуцент E. coli (ER2566)/pERVEGF165, продуцирующий рекомбинантный сосудистый эндотелиальный фактор роста.

Заключение:

1. Осуществлен химико-ферментативный синтез гена белка VEGF165, и клонирование в экспрессирующий вектор pET23d(+).

2. Получен высокоэффективный штамм-продуцент E. coli (ER2566)/pERVEGF165, продуцирующий рекомбинантный сосудистый эндотелиальный фактор роста.

VEGF – сосудистый эндотелиальный фактор роста

(Vascular endothelial growth factor)

VEGFR-1 – мембранный рецептор 1 сосудистого эндотелиального

фактора роста (Vascular endothelial growth factor receptor)

VEGFR-2 – мембранный рецептор 2 сосудистого эндотелиального

фактора роста (Vascular endothelial growth factor receptor)

FGF-1, -2 – фактор роста фибробластов (fibroblast growth factor)

FGFR – рецептор фактора роста фибробластов

PDGF – тромбоцитарный фактор роста (platelet derived growth factor)

PDGFR – рецептор тробмоцитарного фактора роста

HIF-1 – фактор, индуцируемый при гипоксии (hypoxic inducible factor)

Ang-1,-2 - ангиопоэтины

PAS - семейство доменов (PER-ARNT-SIM)

Per – белок кодируемый геном Drosophila melanogaster, отвечающий за

биоритмы организма (period circadian protein)

Arnt – аryl hidrocarbon receptor nuclear translocator protein

SIM – single minded protein

bHLH - семейство факторов транскрипции («спираль-петля-спираль»)

(basic Helix-Loop-Helix)

pVHL - опухолевый супрессор (von Hippel Lindau)

Tie-2 - мембранный киназный рецептор (Tunica interna endothelial

kinase-2)

MAPK - митоген-активированная киназа (mitogen-activated

protein kinase)

PI3K- фосфатидилинозитол 3-киназа (phosphatidylinositol 3-kinase)

Grb2 - белок сателлит фактора роста (Growth factor receptor-bound

protein 2)

FRS-2 – субстрат рецептора фактора роста фибробластов (Fibroblast growth factor receptor substrate 2)

Ras – сигнальный белок, принадлежащий семейству малых

гуанозинтрифосфатаз

Raf - сигнальный белок, серин/треонин-специфичная протеин-киназа

ERK – внутриклеточная сигнальная киназа (extracellular-regulated kinase)

MEK - митоген-активированная киназа киназа (Mitogen-activated protein

kinase kinase)

Src – семейство протоонкогенных тирозин киназ

C-Kit – поверхностный цитокиновый рецептор

ECM – межклеточный матрикс (extracellular matrix)

ATP - аденозин-5`-трифосфат

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИПТГ – изопропилтио-?-D-галактозид

ПААГ – полиакриламидный гель

ПЦР - полимеразная цепная реакция

Трис - трис(гидроксиметил)метиламин

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

DTT – 1,4-дитиотреитол

dNTP – дезоксирибонуклеозид-5`-трифосфаты

SDS - додецилсульфат натрия

TEMED – N,N,N,N-тетраметилэтилендиамин

Amp – ампициллин

Список литературы:

1. Los M, Roodhart JM, Voest EE (April 2007). "Target practice: lessons from phase III trials with bevacizumab and vatalanib in the treatment of advanced colorectal cancer". The Oncologist 12 (4): 443–50. doi: 10. 1634/theoncologist. 12-4-443. PMID 17470687.

2. Growth factor at Dorland's Medical Dictionary.

3. Goustin A. S. Leof E. B. Shipley G. D. , Moses H. L. Growth factors and cancer. Cancer Res. 1986 Mar;46(3):1015-29.

4. Марри Р. и др. Биохимия человека. М. , 1993.

5. Stoker M, Gherardi E. Regulation of cell movement: the motogenic cytokines. Biochim. Biophys. Acta 1072 ( 1991 ), 81

6. Deuel T. F. Polypeptide growth factors: roles in normal and abnormal cell growth. Annu Rev Cell Biol. 1987;3:443-92.

7. Datto, M. B. , Hu, P. P. , Kowalik, T. F. , Yingling, J. , and Wang, X. F. (1997) Mol. Cell. Biol. , 17, 2030-2037.

8. Cross M, Dexter T. M. Growth factors in development, transformation, and tumorigenesis. Cell. 1991 Jan 25;64(2):271-80.

9. Коган А. Х. Патофизиология опухолей М. , 1991

10. Reddi AH, Reddi A (2009). "Bone morphogenetic proteins (BMPs): from morphogens to metabologens". Cytokine & growth factor reviews 20 (5-6): 341–2. doi:10. 1016/j. cytogfr. 2009. 10. 015. PMID 19900831

11. Carpenter G, Cohen S (May 1990). "Epidermal growth factor". The Journal of Biological Chemistry 265 (14): 7709–12. PMID 2186024.

12. Siren AL et al. (2001). "Erythropoietin prevents neuronal apoptosis after cerebral ischemia and metabolic stress". Proc Natl Acad Sci USA 98 (7): 4044–4049. doi:10. 1073/pnas. 051606598. PMC 31176. PMID 11259643.

13. Finklestein S. P. , Plomaritoglou A. (2001). "Growth factors". In Miller L. P. , Hayes R. L. , eds. Co-edited by Newcomb J. K. . Head Trauma: Basic, Preclinical, and Clinical Directions. New York: Wiley. pp. 165–187. ISBN 0471360155.

14. Sallerfors B, Olofsson T (1993). "Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) secretion by adherent monocytes measured by quantitative immunoassays". Eur. J. Haematol. 49 (4): 199–207.

15. Nakamura T (1992). "Structure and function of hepatocyte growth factor. ". Prog. Growth Factor Res. 3 (1): 67–85. doi:10. 1016/0955-2235(91)90014-U. PMID 1838014.

16. Cohen P, Peehl DM, Lamson G, Rosenfeld RG (1991). "Insulin-like growth factors (IGFs), IGF receptors, and IGF-binding proteins in primary cultures of prostate epithelial cells". Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 73 (2): 401–7. doi:10. 1210/jcem-73-2-401. PMID 1713219.

17. Hannink M, Donoghue DJ (1989). "Structure and function of platelet-derived growth factor (PDGF) and related proteins". Biochim. Biophys. Acta 989 (1): 1–10. PMID 2546599.

18. Luetteke NC, Lee DC (1991). "Transforming growth factor alpha: expression, regulation and biological action of its integral membrane precursor". Semin. Cancer Biol. 1 (4): 265–75. PMID 2103501.

19. Khalil N (1999). "TGF-beta: from latent to active". Microbes Infect1 (15): 1255–63. doi:10. 1016/S1286-4579(99)00259-2. PMID 10611753.

20. Dowlati Y, Herrmann N, Swardfager W, Liu H, Sham L, Reim EK, Lanct?t KL (2010). "A meta-analysis of cytokines in major depression". Biol Psychiatry 67 (5): 446–457.

21. Ferrara N, Davis-Smyth T. The biology of vascular endothelial growth factor. Endocr Rev. 1997 Feb;18(1):4-25. PMID:9034784

22. Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress. Endocr Rev. 2004 Aug;25(4):581-611. PMID:15294883 doi:10. 1210/er. 2003-0027.

23. Robinson CJ, Stringer SE. The splice variants of vascular endothelial growth factor (VEGF) and their receptors. J Cell Sci. 2001 Mar;114(Pt 5):853-65. PMID:11181169.

24. Muller YA, Christinger HW, Keyt BA, de Vos AM. The crystal structure of vascular endothelial growth factor (VEGF) refined to 1. 93 A resolution: multiple copy flexibility and receptor binding. Structure. 1997 Oct 15;5(10):1325-38

25. Muller YA, Li B, Christinger HW, Wells JA, Cunningham BC, de Vos AM. Vascular endothelial growth factor: crystal structure and functional mapping of the kinase domain receptor binding site. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Jul 8;94(14):7192-7. PMID:9207067.

26. Bates DO, Cui TG, Doughty JM, Winkler M, Sugiono M, Shields JD, Peat D, Gillatt D, Harper SJ. VEGF165b, an inhibitory splice variant of vascular endothelial growth factor, is down-regulated in renal cell carcinoma. Cancer Res. 2002 Jul 15;62(14):4123-31.

27. B. A. Keyt, L. T. Berleau, H. V. Nguyen, H. Chen, H. Heinsohn, R. Vandlen, N. Ferrara. The Carboxy-terminal Domain (111-165) of Vascular Endothelial Growth Factor is Critical for its Mitogenic Potency. J. Biol. Chem. , 1996, 271, 7788-7795.

28. John S. Penn (11 March 2008). Retinal and Choroidal Angiogenesis. Springer. pp. 119–. ISBN 9781402067792. Retrieved 26 June 2010.

29. http://www. ncbi. nlm. nih. gov/books/NBK10107/

30. Burri, PH; Hlushchuk, R; Djonov, V (2004). "Intussusceptive angiogenesis: its emergence, its characteristics, and its significance". Dev Dyn. 231 (3): 474–88. doi:10. 1002/dvdy. 20184. PMID 15376313.

31. Keyt BA, Nguyen HV, Berleau LT, Duarte CM, Park J, Chen H, Ferrara N. Identification of vascular endothelial growth factor determinants for binding KDR and FLT-1 receptors. Generation of receptor-selective VEGF variants by site-directed mutagenesis. J Biol Chem. 1996 Mar 8;271(10):5638-46. PMID:8621427.

32. Pieren M, Prota AE, Ruch C, Kostrewa D, Wagner A, Biedermann K, Winkler FK, Ballmer-Hofer K. Crystal structure of the Orf virus NZ2 variant of vascular endothelial growth factor-E. Implications for receptor specificity. J Biol Chem. 2006 Jul 14;281(28):19578-87. Epub 2006 May 3. PMID:16672228 doi:10. 1074/jbc. M601842200

33. W. J. Fairbrother, M. A. Champe, H. W. Christinger, B. A. Keyt, M. A Starovasnik, Solution structure of the heparin-binding domain of vascular endothelial growth factor. Structure 1998, 15; 6(5), 637-48.

34. Reviews: VEGF receptor signalling - in control of vascular function (Anna-Karin Olsson, Anna Dimberg, Johan Kreuger and Lena Claesson-Welsh).

35. Koch A. E. , Harlow L. A. , Haines G. K. , Amento E. P. , Unemori E. N. , Wong W. L. , Pope R. M. and Ferrara N. Vascular endothelial growth factor. A cytokine, modulating angiogenesis in rheumatoid arthritis. J. Immunol. 1994. 152, 4149-4156.

36. Folkman J. and Klagsbrun M. Angiogenic factors (review). Science. 1987. 235, 442-447.

37. Ferrara N, Gerber HP, LeCouter J. The biology of VEGF and its receptors. Nat Med. 2003 Jun;9(6):669-76.

Бесплатные работы:

Рекомендованные документы: